Uchafuzi wa tamaduni za seli unaweza kwa urahisi kuwa tatizo la kawaida katika maabara za utamaduni wa seli, wakati mwingine kusababisha madhara makubwa sana.Uchafuzi wa utamaduni wa seli unaweza kugawanywa katika makundi mawili, uchafu wa kemikali kama vile uchafu wa kati, seramu na maji, endotoxins, plasticizers na sabuni, na uchafu wa kibiolojia kama vile bakteria, molds, yeasts, virusi, mycoplasmas msalaba maambukizi.Imechafuliwa na mistari mingine ya seli.Ingawa haiwezekani kuondoa kabisa uchafuzi, mzunguko na ukali wake unaweza kupunguzwa kwa kuelewa chanzo chake na kufuata mbinu nzuri za aseptic.
1. Sehemu hii inaangazia aina kuu za uchafuzi wa kibiolojia:
Ukolezi wa bakteria
Uchafuzi wa mold na virusi
Ukolezi wa Mycoplasma
Ukolezi wa chachu
1.1 Ukolezi wa bakteria
Bakteria ni kundi kubwa la microorganisms za kila mahali zenye seli moja.Kwa kawaida huwa na kipenyo cha mikroni chache na zinaweza kuwa na maumbo mbalimbali, kutoka tufe hadi vijiti na ond.Kwa sababu ya kuenea kwao, ukubwa, na kasi ya ukuaji wa haraka, bakteria, pamoja na chachu na molds, ni uchafuzi wa kibiolojia wa kawaida katika utamaduni wa seli.
1.1.1 Utambuzi wa Uchafuzi wa Bakteria
Ukolezi wa bakteria hugunduliwa kwa urahisi kwa ukaguzi wa kuona wa utamaduni ndani ya siku chache baada ya kuambukizwa;
Tamaduni zilizoambukizwa kwa kawaida huonekana kuwa na mawingu (yaani, machafu), wakati mwingine na filamu nyembamba juu ya uso.
Matone ya ghafla katika pH ya kati ya utamaduni pia hukutana mara kwa mara.
Chini ya darubini ya nguvu ya chini, bakteria huonekana kama chembechembe ndogo zinazosonga kati ya seli, na uchunguzi chini ya darubini yenye nguvu nyingi unaweza kutatua maumbo ya bakteria binafsi.
1.2 Uchafuzi wa ukungu na Virusi
1.2.1 Uchafuzi wa ukungu
Moulds ni vijidudu vya yukariyoti vya ufalme wa kuvu ambao hukua katika mfumo wa nyuzi nyingi zinazoitwa hyphae.Mitandao ya kiunganishi ya nyuzi hizi nyingi za seli ina viini vinavyofanana kijeni vinavyoitwa makoloni au mycelium.
Sawa na uchafuzi wa chachu, pH ya utamaduni hubaki thabiti wakati wa awamu ya kwanza ya uchafuzi na kisha huongezeka kwa kasi kama utamaduni unavyoambukizwa zaidi na kuwa na mawingu.Chini ya darubini, mycelium kawaida huwa na nyuzi, wakati mwingine kama nguzo mnene za spora.Spores za ukungu nyingi zinaweza kuishi katika mazingira magumu sana na yasiyofaa wakati wa awamu yao ya kulala na huwashwa tu wakati hali sahihi za ukuaji zinapatikana.
1.2.2 Ukolezi wa Virusi
Virusi ni wakala wa kuambukiza wa hadubini ambao huchukua mitambo ya seli jeshi kwa ajili ya kuzaliana.Ukubwa wao mdogo sana huwafanya kuwa vigumu kutambua katika utamaduni na kuondoa kutoka kwa vitendanishi vinavyotumika katika maabara za utamaduni wa seli.Kwa kuwa virusi vingi vina mahitaji makali sana kwa wenyeji wao, kwa kawaida haziathiri vibaya tamaduni za seli za spishi zingine isipokuwa mwenyeji.
Hata hivyo, matumizi ya tamaduni za seli zilizoambukizwa na virusi zinaweza kusababisha hatari kubwa kwa afya ya wafanyakazi wa maabara, hasa ikiwa seli za binadamu au nyani zinakuzwa katika maabara.
Maambukizi ya virusi katika tamaduni za seli yanaweza kugunduliwa kwa hadubini ya elektroni, kuzuia kinga kwa seti ya kingamwili, ELISA, au PCR na viambatisho vinavyofaa vya virusi.
1.3 Ukolezi wa Mycoplasma
Mycoplasmas ni bakteria rahisi bila kuta za seli, na hufikiriwa kuwa viumbe vidogo zaidi vinavyojirudia.Kwa sababu ya ukubwa wao mdogo (kawaida chini ya micron 1), mycoplasma ni vigumu kutambua hadi kufikia msongamano wa juu sana na kusababisha tamaduni za seli kuharibika;Hadi wakati huo, kwa kawaida hakuna dalili dhahiri ya maambukizi.
1.3.1 Kugundua uchafuzi wa mycoplasma
Baadhi ya mycoplasma zinazokua polepole zinaweza kudumu katika tamaduni bila kusababisha kifo cha seli, lakini hubadilisha tabia na kimetaboliki ya seli mwenyeji katika tamaduni.
Maambukizi ya mycoplasma ya muda mrefu yanaweza kuwa na sifa ya kupungua kwa kiwango cha kuenea kwa seli, kupungua kwa msongamano wa kueneza na agglutination katika utamaduni wa kusimamishwa.
Hata hivyo, njia pekee ya kuaminika ya kugundua uchafuzi wa mycoplasma ni kupima utamaduni mara kwa mara kwa kutumia rangi ya fluorescent (kwa mfano, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiography, au kupima microbial.
1.4 Uchafuzi wa chachu
Chachu ni yukariyoti yenye seli moja ya ufalme wa kuvu, kuanzia ukubwa wa mikroni chache (kawaida) hadi mikroni 40 (mara chache).
1.4.1Ugunduzi wa uchafuzi wa chachu
Kama ilivyo kwa uchafuzi wa bakteria, tamaduni zilizochafuliwa na chachu zinaweza kuwa na mawingu, haswa ikiwa uchafuzi uko katika hatua ya juu.pH ya tamaduni zilizochafuliwa na chachu hubadilika kidogo sana hadi uchafuzi unakuwa mbaya zaidi, katika hatua ambayo pH kawaida huongezeka.Chini ya darubini, chachu huonekana kama chembe za ovoid au duara moja na inaweza kutoa chembe ndogo zaidi.
2.Maambukizi ya njia panda
Ingawa sio kawaida kama uchafuzi wa vijidudu, uchafuzi mwingi wa safu nyingi za seli na HeLa na laini zingine zinazokua kwa haraka ni shida iliyobainishwa wazi na athari mbaya.Pata mistari ya seli kutoka kwa benki za seli zinazojulikana, angalia mara kwa mara sifa za mistari ya seli, na utumie mbinu nzuri za aseptic.Mazoea haya yatakusaidia kuzuia uchafuzi mtambuka.Uwekaji alama za vidole wa DNA, uandishi wa kariyoti na uchapaji isoti unaweza kuthibitisha kama kuna uchafuzi mtambuka katika utamaduni wa seli zako.
Ingawa sio kawaida kama uchafuzi wa vijidudu, uchafuzi mwingi wa safu nyingi za seli na HeLa na laini zingine zinazokua kwa haraka ni shida iliyobainishwa wazi na athari mbaya.Pata mistari ya seli kutoka kwa benki za seli zinazojulikana, angalia mara kwa mara sifa za mistari ya seli, na utumie mbinu nzuri za aseptic.Mazoea haya yatakusaidia kuzuia uchafuzi mtambuka.Uwekaji alama za vidole wa DNA, uandishi wa kariyoti na uchapaji isoti unaweza kuthibitisha kama kuna uchafuzi mtambuka katika utamaduni wa seli zako.
Muda wa kutuma: Feb-01-2023