Moja ya faida kuu za utamaduni wa seli ni uwezo wa kuendesha kemia ya kimwili ya uzazi wa seli (yaani joto, pH, shinikizo la osmotic, O2 na CO2 mvutano) na mazingira ya kisaikolojia (yaani homoni na mkusanyiko wa virutubisho).Mbali na hali ya joto, mazingira ya kitamaduni yanadhibitiwa na njia ya ukuaji.
Ingawa mazingira ya kisaikolojia ya kitamaduni si wazi kama mazingira yake ya kimwili na kemikali, uelewa bora wa vipengele vya seramu, utambuzi wa vipengele vya ukuaji vinavyohitajika kwa kuenea, na ufahamu bora wa mazingira madogo ya seli katika utamaduni.(Yaani mwingiliano wa seli, mgawanyiko wa gesi, mwingiliano na tumbo) sasa inaruhusu mistari fulani ya seli kukuzwa katika midia isiyo na seramu.
1.Mazingira ya kitamaduni huathiri ukuaji wa seli
Tafadhali kumbuka kuwa hali ya utamaduni wa seli ni tofauti kwa kila aina ya seli.
Matokeo ya kupotoka kutoka kwa hali za kitamaduni zinazohitajika kwa aina fulani ya seli hutofautiana kutoka kwa usemi wa phenotipu zisizo za kawaida hadi kushindwa kabisa kwa utamaduni wa seli.Kwa hivyo, tunapendekeza kwamba ufahamu laini ya simu inayokuvutia na ufuate kikamilifu maagizo yaliyotolewa kwa kila bidhaa unayotumia katika jaribio lako.
2.Tahadhari za kuunda mazingira bora ya utamaduni wa seli kwa seli zako:
Vyombo vya habari vya kitamaduni na seramu (tazama hapa chini kwa habari zaidi)
viwango vya pH na CO2 (tazama hapa chini kwa habari zaidi)
Panda plastiki (tazama hapa chini kwa habari zaidi)
Joto (tazama hapa chini kwa habari zaidi)
2.1 Vyombo vya Habari vya Utamaduni na Seramu
Njia ya utamaduni ni sehemu muhimu zaidi ya mazingira ya kitamaduni, kwa sababu hutoa virutubisho, vipengele vya ukuaji na homoni zinazohitajika kwa ukuaji wa seli, na kudhibiti pH na shinikizo la kiosmotiki la utamaduni.
Ingawa majaribio ya awali ya utamaduni wa seli yalifanywa kwa kutumia vyombo vya habari asilia vilivyopatikana kutoka kwa dondoo za tishu na vimiminika vya mwili, hitaji la kusawazisha, ubora wa vyombo vya habari, na kuongezeka kwa mahitaji kulisababisha uundaji wa midia mahususi.Aina tatu za msingi za vyombo vya habari ni vyombo vya habari vya basal, vyombo vya habari vilivyopunguzwa vya serum na vyombo vya habari visivyo na serum, na vina mahitaji tofauti ya ziada ya serum.
2.1.1 Msingi wa kati
Gibco kiini utamaduni wa kati
Mistari mingi ya seli hukua vyema katika midia msingi iliyo na amino asidi, vitamini, chumvi isokaboni, na vyanzo vya kaboni (kama vile glukosi), lakini michanganyiko hii ya msingi ya midia lazima iongezwe na seramu.
2.1.2 Serum iliyopunguzwa kati
Chupa yenye Gibco Low Serum ya Kati
Mkakati mwingine wa kupunguza athari mbaya za seramu katika majaribio ya utamaduni wa seli ni kutumia midia iliyopunguzwa seramu.Serum iliyopunguzwa kati ni fomula ya msingi ya kati yenye virutubisho na mambo yanayotokana na wanyama, ambayo inaweza kupunguza kiasi cha serum kinachohitajika.
2.1.3 Njia isiyo na seramu
Chupa iliyo na kifaa kisicho na seramu cha Gibco
Seramu isiyo na seramu (SFM) huzuia matumizi ya seramu ya wanyama kwa kubadilisha seramu na lishe inayofaa na uundaji wa homoni.Tamaduni nyingi za msingi na mistari ya seli ina michanganyiko ya kati isiyo na serum, ikijumuisha laini ya uundaji wa protini ya Hamster Ovary (CHO) ya Kichina, mistari kadhaa ya seli ya hybridoma, mistari ya wadudu Sf9 na Sf21 (Spodoptera frugiperda), na vile vile mwenyeji wa utengenezaji wa virusi. (kwa mfano, 293, VERO, MDCK, MDBK), n.k. Moja ya faida kuu za kutumia kati isiyo na seramu ni uwezo wa kuchagua kati kwa aina maalum za seli kwa kuchagua mchanganyiko unaofaa wa mambo ya ukuaji.Jedwali lifuatalo linaorodhesha faida na hasara za vyombo vya habari visivyo na serum.
Faida
Ongeza uwazi
Utendaji thabiti zaidi
Usafishaji rahisi na usindikaji wa chini ya mkondo
Tathmini kwa usahihi utendakazi wa seli
Kuongeza tija
Udhibiti bora wa athari za kisaikolojia
Ugunduzi ulioimarishwa wa midia ya simu
Hasara
Mahitaji ya fomula ya kati ya aina ya seli
Haja ya juu reagent usafi
Kupungua kwa ukuaji
2.2.1 kiwango cha pH
Mistari mingi ya kawaida ya seli za mamalia hukua vizuri katika pH 7.4, na tofauti kati ya mistari tofauti ya seli ni ndogo.Hata hivyo, baadhi ya mistari ya seli iliyobadilishwa imeonyeshwa kukua vyema katika mazingira yenye asidi kidogo (pH 7.0 - 7.4), wakati baadhi ya mistari ya seli ya kawaida ya fibroblast inapendelea mazingira ya alkali kidogo (pH 7.4 - 7.7).Laini za seli za wadudu kama vile Sf9 na Sf21 hukua vyema zaidi katika pH 6.2.
2.2.2 kiwango cha CO2
Njia ya ukuaji inadhibiti pH ya tamaduni na huhifadhi seli katika utamaduni ili kupinga mabadiliko katika pH.Kwa kawaida, uakibishaji huu hupatikana kwa kuwa na vibafa hai (kwa mfano, HEPES) au CO2-bicarbonate-based.Kwa sababu pH ya kati inategemea usawa dhaifu wa dioksidi kaboni iliyoyeyushwa (CO2) na bicarbonate (HCO3-), mabadiliko katika CO2 ya anga yatabadilisha pH ya kati.Kwa hivyo, wakati wa kutumia bafa ya kati iliyo na bafa ya msingi wa CO2-bicarbonate, ni muhimu kutumia CO2 ya nje, haswa wakati wa kukuza seli kwenye vyombo vya utamaduni wazi au kukuza laini za seli zilizobadilishwa kwa viwango vya juu.Ingawa watafiti wengi kwa kawaida hutumia CO2 5-7% hewani, majaribio mengi ya utamaduni wa seli kwa kawaida hutumia 4-10% CO2.Hata hivyo, kila kati ina mvutano wa CO2 uliopendekezwa na ukolezi wa bicarbonate ili kufikia pH sahihi na shinikizo la osmotic;kwa habari zaidi, tafadhali rejelea maagizo ya mtengenezaji wa kati.
2.3 Kulima plastiki
Plastiki za utamaduni wa seli zinapatikana katika aina mbalimbali, saizi na nyuso ili kuendana na matumizi mbalimbali ya utamaduni wa seli.Tumia mwongozo wa uso wa plastiki wa utamaduni wa seli na mwongozo wa chombo cha utamaduni wa seli hapa chini ili kukusaidia kuchagua plastiki inayofaa kwa matumizi ya utamaduni wa seli.
Tazama plastiki zote za utamaduni wa seli za Thermo Scientific Nunc (kiungo cha utangazaji)
2.4 Halijoto
Joto bora kwa utamaduni wa seli hutegemea kwa kiasi kikubwa joto la mwili la mwenyeji ambamo seli zimetengwa, na kwa kiwango kidogo juu ya mabadiliko ya anatomiki ya joto (kwa mfano, joto la ngozi linaweza kuwa chini kuliko ile ya misuli ya mifupa. )Kwa utamaduni wa seli, Kuzidisha joto ni tatizo kubwa zaidi kuliko overheating.Kwa hiyo, hali ya joto katika incubator kawaida huwekwa chini ya joto bora.
2.4.1 Halijoto ya kufaa zaidi kwa mistari mbalimbali ya seli
Mistari mingi ya seli za binadamu na mamalia huwekwa kwenye 36°C hadi 37°C kwa ukuaji bora.
Seli za wadudu hupandwa kwa 27 ° C kwa ukuaji bora;hukua polepole zaidi kwa joto la chini na halijoto kati ya 27°C na 30°C.Zaidi ya 30 ° C, uhai wa seli za wadudu hupungua, hata ikiwa inarudi 27 ° C, seli hazitapona.
Mistari ya seli ya ndege inahitaji 38.5°C ili kufikia ukuaji wa juu zaidi.Ingawa seli hizi zinaweza kuhifadhiwa kwa 37 ° C, zitakua polepole zaidi.
Mistari ya seli inayotokana na wanyama wenye damu baridi (kama vile amfibia, samaki wa maji baridi) inaweza kustahimili kiwango kikubwa cha joto kati ya 15°C hadi 26°C.
Muda wa kutuma: Feb-01-2023